Макет страницы
Фамилий студента
Фронт растворителя
I I
У
о о
стинку так, чтобы та часть бумаги, где нарисованы кружки, оставалась на весу и не касалась поверхности стекла. Далее при помощи капилляров, специально приготовленных для каждого раствора, на бумагу в кружочки последовательно наносят капельки растворов исследуемых смесей аминокислот и «свидетелей» так, чтобы наносимая капля не распространялась за пределы нарисованного кружочка. Нанесение раствора на каждый кружочек производится 5—8 раз после высыхания предыдущей капли.
После высыхания всех нанесенных капель надо тщательно вымыть руки с мылом, свернуть бумагу в цилиндр и сшить лист через край так, чтобы края не накладывались друг на друга и получился более или менее правильный цилиндр. Особое внимание следует обратить на то, чтобы при сшивании точки А и Б (см. рис. 18) совпали.
На дно стеклянного цилиндра (осторожно, чтобы не замочить стенок) наливают смесь растворителей — «-бутилового спирта, уксусной кислоты и воды (4:1:5 по объему). Высота слоя растворителя не должна превышать 2 см от дна цилиндра.
Затем бумажный цилиндр осторожно ставят вертикально в стеклянный цилиндр так, чтобы он не касался стенок и чтобы нанесенные капли находились на нижнем конце бумажного цилиндра. Для хорошего центрирования бумажного цилиндра в стеклянном часто приходится использовать кусочки мятой фильтровальной бумаги, которые следует прокладывать сверху между стенками бумажного и стеклянного цилиндров. Стеклянный цилиндр плотно закрывается крышкой с резиновой прокладкой и оставляется на ночь.
На следующее утро следует осторожно вынуть бумажный цилиндр, пометить карандашом границу фронта растворителя, распороть шов, выпрямить бумагу и повесить ее для высушивания под тягу. Через 4—5 ч растворитель полностью испаряется, и хроматограмму можно проявлять. В качестве проявителя для «-аминокислот применяется раствор нингидрина в метаноле или ацетоне.
При взаимодействии а-амщокислот с нингидрином образуется окрашенное вещество:
Й
о
20мм =Ы=о
Ban Гли К Фен Rm H
-ПОмм-
25 мп
T
Рис. 18. Определение Hf аминокислот при хроматографии на бумаге:
AB — линия старта; К —контрольная смесь.